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亚博体育网上注册分类:细胞生物学
亚博体育网上注册小类:细胞凋亡检测试剂盒
货号:556547
亚博体育网上注册名称:BD细胞凋亡检测试剂盒
英文名称:ANXN V FITC APOPTOSIS DTEC KIT I 100TST
品牌:BD
规格:询问
价格:3723
说明:

亚博体育网上注册涉及细胞因子、信号转导、凋亡、细胞周期调节和神经生物学等领域。公司开发的单克隆、多克隆系列抗体、蛋白表达系统和重组蛋白在科研以及临床研究中享有很高的声誉,BD在流式检测领域的优势,成为流式抗体的主要供应商之一.

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染检测试剂盒说明书
一、概述

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在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。AnnexinV是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin VPI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。


二、试剂盒组份????????????

Product code Description
556547???????? Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I?? BD
公司
Components:
556547a???? ?Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b????? Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c???? ?Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)
????????????
三、步骤?
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贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用1×PBS1×bindingbuffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTACa2+螯合,影响Annexin V的结合。
1)用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer
2)细胞收集。悬浮细胞收集:离心5分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后(注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合),于室温2000rpm离心510分钟,收集细胞;
3)细胞洗涤:用预冷1×PBS4℃)重悬细胞一次,2000rpm离心510分钟,洗涤细胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
5Annexin V-FITC标记:加入5μLAnnexin V-FITC混匀后,避光,室温孵育15分钟;
6PI标记:上机前5分钟再加入5μLPI染色。
7)上机前,补加200μL1×Binding Buffer

四、保存:4℃保存,两个月内可保持稳定;避免反复冻融。

五、注意事项
1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
2PIpropidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
5)在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
7PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,最短可在上机前5分钟再加入PI染色。


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